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    1. 抗體亞型的鑒定

      亞型指的是相同的構成方式,但是空間結構不同的蛋白質結構。下載抗體亞型,指的是在機體內產生的“Y”構型的免疫球蛋白(Ig),基于小分子多肽結構上的差異,可以進一步的進行細分。

      抗體亞型

      重鏈

      抗體以一個或者多個“Y”字形單體存在,每個“Y”字形單體由 4 條多肽鏈組成,包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。?通常,抗體的種類由重鏈決定。例如哺乳動物Ig的重鏈一共有五種,分別用希臘字母α、δ、ε、γ和 μ 來命名,相對應組成的抗體就稱為 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。其中,人的γ可以進一步細分為γ1、γ2、γ3、γ4等亞類,分別對應IgG1, IgG2, IgG3和IgG4四個亞型,小鼠γ可以進一步細分為γ1、γ2a、γ2b、γ3等亞類,分別對應IgG1, IgG2a, IgG2b和 IgG3四個亞型。

      輕鏈

      哺乳動物有兩種輕鏈:λ型和κ型。出于科研的需要,人們也會對輕鏈的亞型進行鑒定。

      類/亞類 重鏈 輕鏈 分子量(kDa) 結構 功能
      IgA1
      IgA2
      α1
      α2
      λ或κ 150-600 單體-四聚體 IgA有血清型和分泌型,血清型IgA不顯示重要的免疫功能,分泌型IgA存在于分泌液中,如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管分泌液等,是機體粘膜局部抗感染免疫的主要抗體。
      IgD δ λ或κ 150 單體 功能不詳;
      與IgM共同存在于B細胞發育的各個階段;大部分與B細胞結合。
      IgE ε λ或κ 190 單體 結合變應原引發巨細胞釋放組胺,可以對抗寄生蟲感染。
      IgG1
      IgG2
      IgG3
      IgG4
      γ1
      γ2
      γ3
      γ4
      λ或κ 150 單體 血清中最主要的免疫球蛋白。在免疫反應中最主要的抵御病原的侵襲的抗體為IgG;
      可通過胎盤。
      IgM μ λ或κ 900 五聚體 最早產生的反應性抗體,在B細胞表面表達,分泌型有很高的親和力。在B細胞介導的免疫反應早期,產生足夠的IgG之前發揮消除病原菌的作用。

      表1:不同亞型抗體的結構與功能

      抗體亞型鑒定

      ELISA測定抗體亞型原理抗體亞型鑒定的原理是利用酶聯免疫吸附實驗(ELISA),測定待測抗體與不同亞型特異性的抗體的結合情況,找出可以與待測抗體特異性結合的抗體,由于與待測抗體結合的抗體的特異性都是已知的,依據結合抗體的特異性可以得出待測抗體的亞型。以小鼠抗體亞型的測定為例,利用ELISA測定待測抗體與針對小鼠IgG1、IgG2A、 IgG2B、 IgG3、IgM、λ、κ有特異性的抗體的結合情況。如果待測抗體抗體可以與針對小鼠IgG1的特異性抗體結合(通過肉眼觀察顏色深淺或通過測OD值判斷),則該抗體的亞型為IgG1。以此類推,也可以測出輕鏈的亞型。

      鑒定方法

      目前比較常用的方法是利用試劑盒進行抗體亞型的鑒定,按照試劑盒說明書進行操作,便可以直觀的讀出抗體的亞型。

      利用試劑盒鑒定抗體亞型常見問題與解決方法:

      常見問題 可能原因 解決方案
      多種重鏈結果 腹水中有雜抗體 將腹水樣本至少 1:100000稀釋
      樣本中抗體濃度過高 再將樣本 1:2-1:10 稀釋
      雜交瘤細胞中含有多種細胞系 亞克隆雜交瘤細胞
      顯色較慢或顏色較弱 樣本中抗體濃度低 減少稀釋倍數;延長顯色時間
      結果難以判定 多種重鏈或輕鏈結果 再將樣本 1:4 或 1:8 稀釋后重新檢測

      表2:常見問題與解決方案

      抗體亞型鑒定的意義

      不同亞型的抗體在結構上有所區別,其免疫源性與在體內發揮的作用存在差異,對抗體進行進一步的細分,并進行抗體亞型鑒定,對于疾病作用機理的研究、抗體藥物的開發有重要意義。

      相關服務

      抗體亞型鑒定服務:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgM,IgA的鑒定。

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